賽默飛公司旗下NanoDrop One（NanoDrop One Micro volume UV-Vis Spectrophotometer）、NanoDrop OneC為代表的微量紫外可見光度計產(chǎn)品在分子生物學(xué)實(shí)驗中應(yīng)用的大獲成功，最重要的原因就是應(yīng)時而生：只需區(qū)區(qū)2μL而非20μL、50μL、100μL、500μL甚至750μL樣品，就完成了核酸的純度（A260/A280、A260/A230）和濃度（A260）的測定工作，首先從樣品體積上實(shí)現(xiàn)了affordable。其次，測試中無須消耗一次性紫外透射型比色皿，無須進(jìn)行裝樣-測定-清洗比色皿-再重新上樣的重復(fù)操作。只需低廉、干凈的拭紙一角輕輕擦拭兩下，就可進(jìn)行下一個樣品的測定，時間和經(jīng)濟(jì)帳上更是affordable。
       在各種渠道和形式的宣傳中，NanoDrop系列微量紫外可見光度計儼然成了終身免校正、免維護(hù)的“國民紫外”。而對實(shí)驗者和儀器管理人員，來之即用，用后關(guān)機(jī)，維護(hù)全免，正好落個清閑！
       那事實(shí)果真如此嗎？
       NanoDrop One、NanoDrop OneC的共同工作部件有觸摸屏、檢測臂和樣品基座。此外，NanoDrop OneC配置有比色皿檢測模塊，用于完成動力學(xué)測試、OD600細(xì)胞/菌體濃度測定、GMP等規(guī)范所要求的稀釋樣品檢測等由常規(guī)紫外可見分光光度計擔(dān)負(fù)的工作。撇開觸摸屏、比色皿模塊這兩部分，NanoDrop儀器常規(guī)樣品測試中，到底有哪些不可或缺的維護(hù)規(guī)程？

一、檢測基座工作面的清潔（Cleaning the Pedestals）
       檢測基座工作面包括上基座（upper pedestal，可升降的檢測機(jī)械臂接觸樣品的部分）和下基座（lower pedestal，底座上承接液樣的突起柱頭）。上下基座外圍為白色303不銹鋼材質(zhì)，正中為可透射紫外的石英光學(xué)玻璃窗。

       光學(xué)窗口殘留的液體、普通擦拭用的紙巾纖維以及實(shí)驗室塵埃顆粒、化學(xué)染料附著，都直接干擾吸光度測定值。故基座的仔細(xì)清潔是必不可少的操作環(huán)節(jié)。
       基座清理分為測試樣品間隔的清潔、不同實(shí)驗樣品測定后的清潔和測定中發(fā)生樣品污染的清理。
1.1 兩個樣品測試間隔的基座清潔
       由于NanoDrop系列儀器都是利用液體表面張力作用形成的微細(xì)液柱來測試，光路要從上基座穿透液柱進(jìn)入下基座后進(jìn)行檢測器。因此，清潔時應(yīng)抬起儀器檢測臂，上、下基座全擦遍，而非只把下基座圓柱頭一擦了事。忽略擦拭上基座或擦拭不細(xì)致，殘留細(xì)微液珠勢必造成樣品交叉污染，失去精確測定的意義。

 
       清潔應(yīng)使用適合于潔凈間、精密光學(xué)實(shí)驗設(shè)備用的專業(yè)無絨低塵擦拭紙（譬如金佰利公司Kimwipes小綠盒低塵擦拭紙等），而非日常生活普通清潔紙巾。 

1.2不同用戶上機(jī)前后的基座清潔
       建議每個新用戶在第一次空白對照樣品檢測或樣品檢測前和每批樣品檢測結(jié)束后，使用去離子水(deionized water，DI H2O)或?qū)嶒炇叶壖兯≧O反滲透水）、實(shí)驗室無塵紙，對樣品基座進(jìn)行徹底清理。

       規(guī)范操作手法是：
1）抬起檢測臂，用新的實(shí)驗室無塵紙擦拭上下基座；
2）用移液器吸取將 3–5μL去離子水添加至下基座；
3）降下檢測臂保持2分鐘；
4）抬起檢測臂，用新的無塵紙擦拭上下基座。 

1.3 污染發(fā)生后的徹底清理
       當(dāng)出現(xiàn)樣品底座肉眼可見的殘留（如遺留在基座上的干燥樣品），需使用0.5M的稀鹽酸（HCL）按照1.2步驟進(jìn)行初次清理，然后用去離子水執(zhí)行1.2流程。

二、檢測基座的修復(fù)（Reconditioning the Pedestals）
       NanoDrop One、NanoDrop OneC微量紫外可見光度計是利用液體表面張力作用，通過特殊樣品滯留系統(tǒng)（液體接觸界面），使微量液體在上、下基座間的空隙形成一個細(xì)小液柱。上基座內(nèi)嵌入的光纖線纜連接氙燈光源，下基座內(nèi)嵌入的線纜連接檢測器。檢測臂降下時，光從上而下通過液柱到達(dá)下底座進(jìn)入檢測器，從而生成吸光度與樣品光吸收光譜數(shù)據(jù)曲線。
       拉伸光學(xué)液柱的測量技術(shù)對液體表面張力特征存在依賴。表面張力大的樣品可以正常檢測，而表面張力小，樣品容易出現(xiàn)液柱拉斷，使測量失效。
       已知測試樣品的溫度（溫度升高表面張力減?。?、鹽分含量（水溶液加入無機(jī)鹽后表面張力增大；而低鹽溶液，如脫鹽后的蛋白溶液，表面張力要減少）、非極性溶劑（一般指烷烴，如正己烷、庚烷、苯、甲苯等），表面活性劑/去污劑（如SDS、Triton X100、消泡劑存在的液體樣品，表面張力降低）殘留等多種因素均可顯著樣品溶液表面張力。

       此外，與液體接觸的基座表面的疏水狀態(tài)，對液體獲得足夠大的表面張力極為關(guān)鍵。
       正常使用情況下，隨著使用時間推移，NanoDrop檢測基座的表面也可能會失去其“已調(diào)節(jié)”的屬性，特別是在使用含有異丙醇或表面活性劑（如Bradford法蛋白定量試劑）的溶液測量后(The pedestal surfaces may lose their “conditioned” properties over time, especially after measurements with isopropyl alcohol or solutions that contain surfactants or detergents such as the Bradford reagent. )，基座表面處于未調(diào)節(jié)（unconditioned）的狀態(tài)?！拔凑{(diào)節(jié)”基座會導(dǎo)致滴加在下基座的液滴“變平”，在檢測臂降下時阻礙正常形態(tài)液柱的形成，由此產(chǎn)生的光譜可能看起來顯得“粗糙”或呈“鋸齒狀”。
       因此，檢測基座需要定期維護(hù)以保持檢測的完整性。這一點(diǎn)適用于所有NanoDrop系列單道（如NanoDrop 1000、NanoDrop 2000/2000C、 NanoDrop One/One C、NanoDrop Lite、NanoDrop Lite Plus）、多道（NanoDrop 8000、NanoDrop Eight微量紫外可見光度計。
       無論何時，當(dāng)液滴樣品在基座上呈現(xiàn)扁平形狀（而不是串成“微珠”或形成飽滿的圓形液滴），或液柱在檢測期間碎裂，則須立即對基座修復(fù)以恢復(fù)其表面疏水特性。

2.1 專用基座修復(fù)試劑法
       基座修復(fù)需用到無絨實(shí)驗室無塵紙、移液器(0–2.5μL)和PR-1基座修復(fù)試劑盒。PR-1 基座修復(fù)試劑是一種專門配制的調(diào)整化合物，涂抹到樣品基座工作表面以恢復(fù)其疏水狀態(tài)。
       修復(fù)基座操作步驟為：
1）用點(diǎn)樣棒蘸取PR-1基座修復(fù)試劑；
2）抬起檢測臂并保持此狀態(tài)，在上、下基座表面均勻的涂上薄薄的一層修復(fù)化合物，保持約30秒使PR-1化合物自然揮發(fā)干燥；
3）將干凈的實(shí)驗室無塵紙折疊成合適大小，一只手支撐檢測臂避免損壞檢測臂，擦拭上下基座表面。正常情況下，無塵紙變?yōu)楹谏砀街诨砻娴奈蹪n被有效去除；
4）重復(fù)步驟3，直到上下基座表面擦拭干凈為止；
5）用洗耳球等吹掃去除殘留在基座上的任何紙屑及雜質(zhì)；
6）驗證修復(fù)效果：將1μL去離子水滴加至下基座，水珠串成“微珠”或形成一個圓形液滴，即代表基座成功復(fù)性。

2.2 稀鹽酸修復(fù)法
       PR-1 基座修復(fù)化合物是修復(fù)基座最簡單的方法。如果實(shí)驗室并無PR-1試劑盒儲備，則可用HCL和去離子完成修復(fù)工作，操作步驟如下：
1）抬起儀器檢測臂并將 3μL 0.5M HCL滴加至下基座；
2）降下檢測臂并保持2–3分鐘；
3）抬起檢測臂，用實(shí)驗室無塵紙擦拭上下基座；
4）將 3μL 去離子誰滴加至下基座，以清除HCL；
5）降下檢測臂并保持2–3分鐘；
6）抬起檢測臂，用無塵紙擦拭上下基座；
7）用洗耳球等吹掃去除殘留在基座上的任何紙屑雜質(zhì)。

參考文獻(xiàn)：
NanoDrop Micro-UV/Vis Spectrophotometer User Guide (Rev. E)
NanoDrop 微量紫外/可見光分光光度計用戶手冊 (Rev. B)
Solvent Compatibility and Utility（Nanodrop Instruments Technical Bulletin）