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雷霆收罷江海凝——Optima MAX-XP臺式超速離心機是如何成為細胞外囊泡分離神器的?
1、臺式超速離心機TL-100的科研應用為Optima MAX-XP搭起的舞臺
Beckman公司1984年推出全球首款臺式超速離心機TL-100。它最高轉速100000 rpm/最大RCF 543000×g,已達到同期立式超離的轉速離心力指標,還可配置四款角轉頭(TLA-100、TLA-100.1、TLA-100.2、TLA-100.3)、一款甩平吊籃轉頭(TLS-55)和一款垂直轉頭(TLV-100),實現(xiàn)了功能應用多樣化。TL-100不僅小巧(W 73.7 cm×D 58.4 cm)、輕便(93kg)和操作簡便,價格還相對低廉親民。
在此基礎上,通過引入新型驅動控制單元、Optima制冷控制技術、新型轉頭充實和差異化的系統(tǒng)功能,Beckman陸續(xù)推出Optima TLX/Optima TL、Optima MAX/Optima MAX-E,直至目前在產(chǎn)的Optima MAX-XP/Optima MAX-LT。硬件上,最高工作轉速由100000rpm升至150000rpm,轉頭由6個增至目前的16個,單管最大樣品容量由3.5mL加大至32.4mL??刂葡到y(tǒng)由簡單參數(shù)設定發(fā)展到Optima MAX-XP的自帶計算、轉頭耗材數(shù)據(jù)庫、運行賬戶控制與運行數(shù)據(jù)管理、遠程運行監(jiān)控和生物安全樣品離心功能。創(chuàng)新技術的運用使臺式超速離心機的應用對象、樣品處理能力躍上了新臺階。
1986年,美國農(nóng)業(yè)部與南達科他州立大學聯(lián)合研究項目團隊最早報道用TL-100超速離心機進行的實驗。在該項目中,實驗人員用TLV-100垂直轉頭在8-28%(w / v)蔗糖梯度液中2℃下100000rpm離心20分鐘對0.2mL大豆葉片組織中RuBP羧化酶粗提物的成功純化。
截止至2023年8月31日,全球已刊發(fā)采用TL- 100開展的超速離心實驗論文達897篇??臄?shù)量超過Beckman其他任一超離型號相關刊文數(shù)(見表1。Optima TLX、Optima TL、Optima MAX和Optima MAX-E四款臺式機的資料因技術原因未計入)。
表1 Beckman臺式超速離心機實驗應用公開刊文數(shù)量列表
型號 | 臺式超速離心機 | 立式超速離心機 | |||||
TL-100 | Optima MAX-XP | Optima MAX-TL | Optima L-100XP | Optima L-80XP | Optima XPN 100/90/80 | Optima XE 100/90 | |
刊文數(shù) | 897 | 483 | 105 | 187 | 89 | 448 | 307 |
表1中統(tǒng)計數(shù)據(jù)似與現(xiàn)實觀感頗有出入:科研單位配備的大型落地超速離心機比比皆是,但寰宇之內(nèi)的實驗公開發(fā)文看,小型臺式超離的使用報道頻次卻是遠高于大型立式機。這恰恰反映了一個事實,即臺式超離站在了科研實驗舞臺上那個舉足輕重的C位。
真應了那句俗話:人不可貌相。
TL-100成為爆款還與一項應用和一篇文章有莫大關系。
2006年,法國居里研究所的C. Th′ery, S. Amigorena和G. Raposo聯(lián)合發(fā)表了著名的生物液體外泌體分離的操作流程——《Isolation and Characterization of Exosomes from Cell Culture Supernatants and Biological Fluids》。該文中列出了實驗所用超速離心機為LT-100。
外泌體是直徑30 - 150nm小型細胞外囊泡群。通過差速分級離心將生物樣品溶液中細胞、細胞碎片、大型囊泡去除后,轉移至微量樣品管中,用超速離心方法將外泌體分離。LT-100超離單管樣品處理范圍0.2-3mL,既可用于外泌體沉淀,又能進行密度梯度分選,簡直就是為外泌體分離而生的。此后,隨著操作流程進一步流傳、外泌體研究應用迅速升溫,LT-100大受歡迎。據(jù)ISEV 2016年的問卷調(diào)查報告,全球81%的外泌體研究項目中在使用超速離心分離方法。2007年,隨著Optima MAX-XP臺式超速離心機于面世。LT-100形成的巨大流量被自然而然地輸入了Optima MAX-XP。
與LT-100比,Optima MAX-XP配置的MLA-55(8×13.5mL)和MLA-50(6×32.4mL)兩個中大容量角轉頭,不僅助其在外泌體差速分離操作流程中前后再邁兩步,還在更多類型的研究對象中得以施展身手。
阿拉斯加科技(mypop988.com)服務團隊基于PubMed期刊數(shù)據(jù)庫(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/),以Optima MAX-XP做切入點,對與之有關的實驗應用刊文進行了系統(tǒng)整理,試圖厘清以下三個問題:1)Optima MAX-XP在哪些研究對象的實驗應用中卓有成效?2)Optima MAX-XP在科研實驗超速離心中常用的轉頭有哪些?3)在Optima MAX-XP的超速離心實驗方面存在什么問題?
2、細胞外囊泡超速分離成為Optima MAX-XP臺式超速離心機科研應用的熱點
2009年,由西班牙康普頓斯大學的生物與分子生物學系的研究人員最早發(fā)表了Optima MAX-XP實驗應用的報道。該研究將含有雞膜聯(lián)蛋白A5(chicken annexin A5, cA5)蛋白的單層PG:PC囊泡在Optima MAX-XP超速離心機中4℃下150000×g、離心1 h后,沉淀物和上清液分別采用SDS-PAGE方法檢測cA5與囊泡結合物存在情況,目的是了解人、雞膜聯(lián)蛋白A5(annexin A5)分子通過與囊泡結合后的橋聯(lián)作用誘導PG:PC囊泡聚集(vesicle aggregation)作用的差異及其結構機制。
截止至2023.08.31,PubMed期刊數(shù)據(jù)庫收錄的使用Optima MAX-XP進行的超速離心實驗報道共483篇。其中,刊發(fā)于期刊2023年影響因子(數(shù)據(jù)來源:https://sci.justscience.cn/)6.0及以上者共189篇。
表2 2018 – 2023年Optima MAX-XP有關高分期刊發(fā)文數(shù)量
發(fā)文期刊 | 2023期刊IFloid評分 | 出版年份 | 刊文數(shù)量 |
Nature | 64.8001 | 2018-2020 | 3 |
Cell | 64.5005 | 2019/2023 | 2 |
Science | 56.9000 | 2019 | 1 |
Cell Host Microbe | 30.3013 | 2020 | 1 |
Nat Neurosci | 24.9995 | 2019 | 1 |
Cell Mol Immunol | 24.1000 | 2020 | 1 |
ACS Nano | 17.0997 | 2020/2021 | 2 |
Nat Commun | 16.6000 | 2018-2023 | 28 |
Neuron | 16.2000 | 2021 | 1 |
J Extracell Vesicles | 16.0000 | 2019-2023 | 14 |
Mol Cell | 16.0000 | 2022/2023 | 2 |
J Clin Invest | 15.9000 | 2020 | 1 |
Adv Sci (Weinh) | 15.1004 | 2022-2023 | 3 |
Nat Chem Biol | 14.8000 | 2022 | 1 |
Nat Protoc | 14.8000 | 2020/2022 | 2 |
Sci Adv | 13.6000 | 2018-2023 | 6 |
Theranostics | 12.4000 | 2018-2020 | 3 |
Proc Natl Acad Sci U S A. | 11.1000 | 2018-2022 | 5 |
J Nanobiotechnology | 10.2000 | 2022 | 2 |
對189例用到Optima MAX-XP的超速離心實驗內(nèi)容逐一核查和匯總發(fā)現(xiàn),實驗具體對象大致可歸為細胞外囊泡、蛋白質(zhì)及蛋白復合物、亞細胞組分、納米粒子制劑、脂質(zhì)體和病毒類顆粒6大類。
就應用范圍看,Optima MAX-XP臺式超離與大塊頭的立式超離Optima L-100/90/80XP、Optima XPN-100/90/80、Optima XE-100/ Optima XE-90基本重疊。
在6個研究應用對象中,細胞外囊泡(32.3%)、蛋白類(27.7%)和亞細胞組分(23.6%)三個板塊占比超過80%(見圖1)。
這一事實,使Optima MAX-XP臺式超速離心機儼然地成了細胞外囊泡超速分離的神器。
因此,我們重點關注外泌體超速離心分離這一題材,探討Optima MAX-XP在這一應用范圍的基本規(guī)律、方法。
(后續(xù):Optima MAX-XP臺式超離在外泌體分離中的主要應用類型)