成大業(yè)若烹小鮮-3

      對(duì)于樣品數(shù)量較少或有固定實(shí)驗(yàn)習(xí)慣的PCR/qPCR實(shí)驗(yàn)者而言，PCR單管和八聯(lián)排管是最常用的PCR耗材選項(xiàng)。使用PCR管進(jìn)行PCR反應(yīng)，有兩個(gè)操作環(huán)節(jié)是需注意的：一是反應(yīng)管的有效密封（見《聯(lián)排管蓋操作工具在PCR實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用價(jià)值淺析》），二是反應(yīng)管在樣品模塊上的支持。

      所謂PCR管在反應(yīng)模塊上的支持，是指在樣品模塊上添加必要的支架、支持框類輔助器件，對(duì)PCR反應(yīng)管提供固定、支撐保護(hù)，確保在反應(yīng)過程中所有PCR管受熱均衡，同時(shí),均衡分?jǐn)偀嵘w的壓力，避免發(fā)生樣品管變形、破損。

      查閱伯樂和賽默飛PCR儀用戶指南或清點(diǎn)貨物配置清單會(huì)發(fā)現(xiàn)，伯樂PCR儀隨機(jī)配備有Tube Support Ring/Tube Support Frame，而賽默飛PCR儀標(biāo)配的PCR啟動(dòng)工具套件（PCR Starter kit）中提供了MicroAmp 96-Well Tray，MicroAmp 96-Well Tray /Retainer Set。這些塑料配件正是PCR反應(yīng)管的支架。

       了解這些支架的使用方法，將有助于充分發(fā)揮其為PCR實(shí)驗(yàn)的安全可靠保駕護(hù)航的作用。本文以伯樂和賽默飛PCR儀的隨機(jī)附件為例，就此問題進(jìn)行討論。

       歸納起來，這類PCR反應(yīng)管支架可分為2種，即帶蓋PCR管支架和不帶蓋PCR管支架。

一、帶蓋PCR管支架

      帶蓋PCR管支架，適用于連接有圓頂或平頂管蓋的PCR單管、PCR 8聯(lián)排管或12聯(lián)排管。

      伯樂T100、S1000、C1000 touch PCR儀配置的Tube Support Ring或Tube Support Frame，為一長(zhǎng)方形固定框，可安裝于對(duì)應(yīng)的PCR反應(yīng)模塊上，沒有固定反應(yīng)管的功能，主要起平衡熱蓋壓力的作用。

T100 PCR儀反應(yīng)管支架                                    96孔快速PCR管支架                             96×0.2mL PCR管支架

      伯樂MyCycler PCR儀標(biāo)配了一套上樣托盤/托架（Sample Loading Tray）。這個(gè)托架底部與反應(yīng)模塊匹配，可直接安裝固定在模塊上。內(nèi)部為96孔的PCR管固定網(wǎng)格，PCR反應(yīng)管加樣完成后，插入托架網(wǎng)格中予以固定。樣品管上樣結(jié)束后，即可合上熱蓋啟動(dòng)PCR。

      因此，托架既是反應(yīng)管的“頂天柱”-幫著扛壓和防止擠壓變形，又是PCR反應(yīng)“守護(hù)神”，防止樣品管放歪了受熱不勻?？梢哉f，MyCycler這個(gè)Sample Loading Tray的功能定位，與目前賽默飛主流的Miniamp/Miniamp Plus、Simpliamp、VeritiPro、Proflex PCR儀及Stepone Plus、Quatistudio系列實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀標(biāo)配的96孔反應(yīng)管支架（MicroAmp 96-Well Tray）是異曲同工。

      賽默飛PCR管支架的官方示范教程中，操作主要步驟包括：

      1.1 將反應(yīng)管支架安裝與樣品基座上；

      1.2 在支架上裝填PCR管并實(shí)施反應(yīng)體系的準(zhǔn)備與處理；

      1.3 將PCR管-支架整體從基座上輕柔移除，整體轉(zhuǎn)移至PCR反應(yīng)模塊上安裝，可立即啟動(dòng)PCR程序。

二、無帶蓋PCR管支架

      無帶蓋PCR管支架，即賽默飛提供的96孔固定器-托盤組合支架（96-Well Tray /Retainer Set）。

       該組合支架的上部為PCR管固定器（Retainer），底部為PCR托盤（Tray），兩部分可通過簡(jiǎn)單按壓解鎖的鎖扣連接而成。組合支架適用于無管蓋PCR單管或聯(lián)排管。

      2.1 通過向內(nèi)側(cè)擠壓固定器長(zhǎng)邊卡扣解鎖組合支架，將托盤與固定器分離。將托盤安裝于樣品準(zhǔn)備基座（如最常用的MicroAmp Splash-Free 96-Well Base）上；

      2.2 將PCR管載入托盤和構(gòu)建PCR體系：根據(jù)實(shí)驗(yàn)樣品管數(shù)量多少、樣品管在PCR樣品模塊中排位順序，提前組織排列PCR管，并完成PCR樣品加樣處理；

      2.3 將固定器開孔與托盤上的反應(yīng)管對(duì)齊后放下，稍微施力下壓固定器的邊框，將固定器與底部托盤鎖緊；

      2.4 PCR管密封：將聯(lián)排管蓋與樣品孔對(duì)齊，用PCR管蓋工具或徒手壓蓋完成反應(yīng)管密封。最后組裝成型的效果，從下往上依次是：托盤-PCR管-固定器-管蓋；

       2.5 將已密封的反應(yīng)管、固定器-托盤組合支架整體安裝到PCR儀樣品模塊上，啟動(dòng)PCR。

參考文獻(xiàn)

Sample Loading Tray for the Bio-Rad MyCycler Thermal Cycler